• Виктория

Использование MONTANIDE ISA 78 VG в качестве адъюванта при изготовлении противобактериальных вакцин для кур

На протяжении последних лет в связи с возрастающей интенсификацией современного птицеводства проблема распространения бактериальных инфекций в промышленном птицеводстве становится всё более актуальной. Использование передовых технологий выращивания и высокая продуктивность кроссов приводят к снижению естественной резистентности и повышению восприимчивости птиц к возбудителям бактериальных болезней.

Возникновение в птицеводческих хозяйствах болезней бактериальной этиологии приводит к значительному экономическому ущербу из-за повышенного падежа и выбраковки птиц, снижению мясной и яичной продуктивности, ухудшению биологических качеств эмбрионов и, как следствие, выводимости цыплят, понижению конверсии корма, увеличению затрат на проведение оздоровительных мероприятий. Кроме того, наличие бактериальных болезней приводит к снижению поствакцинального противовирусного иммунитета и повышает чувствительность птиц к стрессам.

Необходимо отметить, что проблему бактериальных болезней птиц в промышленном птицеводстве следует рассматривать не только в ветеринарном аспекте, но и в медико-экологическом, так как сельскохозяйственная птица может быть носителем патогенных для людей микроорганизмов, основными из которых являются сальмонеллы, кампилобактерии, эшерихии, стафилококки, клостридии и др.

Основные способы борьбы и профилактики при большинстве бактериальных болезней — применение антимикробных препаратов и вакцинопрофилактика. Бессистемное применение антимикробных препаратов без учета чувствительности патогенов к лекарственным средствам зачастую не позволяет добиться желаемых результатов, в то время как использование правильно подобранной вакцины с учетом эпизоотологической ситуации в хозяйстве и лабораторных исследований является одним из безопасных и эффективных инструментов контроля болезней бактериальной этиологии.

На сегодняшний день на территории России применяется довольно широкий спектр инактивированных вакцин как отечественного, так и зарубежного производства. Это инактивированные вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза, орнитобактериоза, гемофилеза и респираторного микоплазмоза птиц.

На настоящий момент наряду с достигнутыми положительными результатами эффективности применения противобактериальных инактивированных вакцин в промышленном птицеводстве всё еще существует проблема с их остаточной реактогенностью. Данную проблему можно решить с помощью подбора масляных адъювантов нового поколения.

Цель работы — определить возможность использования модернизированного масляного адъюванта Montanide ISA 78 VG при изготовлении инактивированных вакцин против бактериальных болезней птиц.

Для достижения обозначенной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изготовить на основе адъюванта Montanide ISA 78 VG инактивированные вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза, микоплазмоза и гемофилеза птиц.

2. Изучить физические и биологические свойства изготовленных образцов инактивированных вакцин.

3. Провести анализ полученных результатов и сделать заключение о возможности использования адъюванта Montanide ISA 78 VG при изготовлении ряда инактивированных противобактериальных вакцин для птиц.

Материалы и методы исследования

Все этапы научно-исследовательской работы проводились с использованием материально-технической базы научно-производственного предприятия «АВИВАК». Для решения первой поставленной задачи на основе масляного адъюванта Montanide ISA 78 R VG (SEPPIC, Франция) были изготовлены четыре образца вакцин.

Первый образец против сальмонеллеза птиц — с использованием инактивированной формальдегидом культуры S. enteritidis штамм АТ-С; второй — против пастереллеза птиц с использованием инактивированной формальдегидом P. multocida штамм 115; третий — с использованием инактивированной формальдегидом M. gallisepticum штамм S6; четвертый — против гемофилеза с использованием инактивированных формальдегидам культур Avibacterium paragallinarum штаммов: В-7770 — серотип А, 1130917/АтшВ — серотип В, 150215/ТулаС2 — серотип С.

Изготовление опытных образцов вакцин осуществляли с помощью лабораторного диспергатора (IKA 25T, Германия) путем диспергирования инактивированных культур микроорганизмов в масляном адъюванте Montanide ISA 78 R VG в соотношении 30/70.

При проведении испытаний образцов вакцин визуально оценивали их внешний вид.

Определение контаминации вакцин бактериальной и грибковой микрофлорой проводили по ГОСТ 28085.

Относительную вязкость вакцины определяли с помощью вискозиметра ВНЖ по ГФ XIV Том 1 ОФС.1.2.1.0015.15 с. 595, а стабильность эмульсии вакцины — методом центрифугирования при 4000 об/мин в течение 30 минут.

Определение реактогенности и антигенной активности образцов вакцины проводили на молодняке кур яичного направления 25–40-суточного возраста (n = 80), полученных из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям.

Для определения реактогенности каждым образцом вакцины были иммунизированы по 10 цыплят. Образцы вакцин вводили в объеме 1,0 см3 подкожно в область нижней трети шеи.

Учет реактогенности проводили через 14 суток после иммунизации, для чего птиц подвергали эвтаназии и проводили их вскрытие с целью учета реакции тканей на месте введения вакцины.

Степень реактогенности образцов вакцин оценивали в зависимости от наличия изменений и характера реакции тканей на месте введения вакцины.

Для определения антигенной активности каждым образцом вакцины были иммунизированы по 10 цыплят (самки). Вакцины вводили в объеме 0,5 см3 подкожно в область нижней трети шеи.

С целью определения специфических антител от птиц получали сыворотки крови за сутки до и через 28 суток после вакцинации. Титр антител к S. enteritidis, P. multocida и M. gallisepticum определяли иммуноферментным анализом (ИФА) с использованием тест-систем производства IDEXX (США). Определение титра антител к A. Paragallinarum серотипов А, В и С проводили с использованием реакции агглютинации (РА).

Вакцину считали антигенно активной, если у привитых цыплят среднегрупповой титр антител к:

S. enteritidis, P. multocida и M. gallisepticum в два и более раз превышал минимальный положительный показатель, предусмотренный в наставлении по применению конкретного диагностического набора ИФА (минимальный положительный титр для используемых наборов к S. enteritidis и P. multocida составлял 396, а к M. gallisepticum — 1076);

A. Paragallinarum серотипов А, В и С был не ниже 3,0 log2.

Статистическая оценка полученных результатов проводилась с помощью компьютерных программ OpenOffice Calc, Microsoft Excel, Microsoft Access и IDEXX.

Результаты и обсуждение

Полученные результаты испытаний образцов вакцин на предмет определения внешнего вида, стерильности, относительной вязкости и стабильности эмульсии представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, все четыре образца вакцин представляли собой однородную эмульсию белого цвета, стерильны в отношении бактериальной и грибковой микрофлоры, с  показателями вязкости и стабильности в диапазоне 27–34 мм2/с и 2,0–3,0 мм соответственно.

При учете результатов реактогенности вакцины было установлено, что образцы вакцин против сальмонеллеза, пастереллеза и гемофилеза птиц при введении подкожно в область нижней трети шеи в объеме 1,0 см3 в той или иной степени проявляли реактогенные свойства, вызывая под кожей воспалительные реакции различной степени, которые характеризовались инъекцией сосудов в средней и нижней трети шеи, а также разрастанием соединительной ткани в нижней трети шеи и зоба, в то время, как вакцина против респираторного микоплазмоза птиц была ареактогенна.

Спустя 14 суок после иммунизации вакциной против респираторного микоплазмоза у птиц в месте введения препарата под кожей в области нижней трети шеи были обнаружены остатки вакцины в виде вкраплений размером 0,5 мм, в некоторых случаях была отмечена незначительная инъекция кровеносных сосудов.

Результаты определения антигенной активности образцов вакцин представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, цыплята опытных групп до иммунизации не имели специфических антител к S. enteritidis, P. multocida, M. gallisepticum и A. Paragallinarum серотипам А, В и С, на что указывают отрицательные диагностические среднегрупповые значения.

Спустя 28 суток после иммунизации во всех четырех группах титр антител ко всем антигенным компонентам увеличился до необходимых протективных значений. Так, титр антител к S. enteritidis повысился с 51 до 9607, к P. multocida — с 29 до 7659, к M. gallisepticum — с 32 до 5818, а к A. Paragallinarum серотипам А, В и С — с 0 log2 до 4,0–5,0 log2.

Анализ полученных результатов испытаний показывает, что все образцы вакцин, изготовленные на основе масляного адъюванта Montanide ISA 78 R VG, отвечали заданным параметрам по показателям вязкости и стабильности, обеспечивали формирование гуморального иммунитета необходимого уровня и полностью отвечали требованиям препаратов подобного класса.

Но наряду с хорошими физическими и иммунологическими показателями вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и гемофилеза птиц в той или иной степени проявляли реактогенные свойства, в то время как вакцина против респираторного микоплазмоза птиц была ареактогенна.

Возможность проявления реактогенных свойств является основным недостатком применения многих инактивированных вакцин, особенно против бактериальных болезней птиц. При применении таких препаратов на месте их введения отмечают местные тканевые реакции, которые проявляются в виде отека и воспаления в месте инъекции, изменения цвета мышц, гранулематозных поражений тканей, что приводит к различным отрицательным последствиям.

Бесспорно, проблему реактогенности инактивированных противобактериальных вакцин во многом можно решить за счет использования более безопасных масляных адъювантов нового поколения, но это, к сожалению, не всегда позволяет решить вопрос в полной мере. В то же время реактогенность противобактериальных вакцин можно существенно снизить за счет использования при изготовлении препаратов очищенных антигенных комплексов бактериальных клеток без содержания каких-либо «балластных» клеточных структур микробной клетки, которые не участвуют в формировании иммунного ответа к возбудителю болезни.

Выводы

Адъювант Montanide ISA 78 R VG может быть использован для изготовления вакцины против респираторного микоплазмоза птиц. Изготовление инактивированных эмульсионных вакцин против сальмонеллеза, пастереллеза и гемофилеза птиц на основе адъюванта Montanide ISA 78 R VG возможно только после внесения ряда изменений в технологию изготовления данных препаратов, направленных на снижение их реактогенных свойств.

Это послужило основанием для планирования дальнейших исследований, направленных на изыскание оптимального метода получения чистых фракций протективных белков S. enteritidis, P. multocida и A. Paragallinarum, которые будут использованы в качестве иммуногенов при изготовлении субъединичных эмульсионных вакцин на основные адъюванта Montanide ISA 78 R VG.

Об авторах

Сергей Вячеславович Панкратов; доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии, кандидат ветеринарных наук

https://orcid.org/0000-0001-6824-1503; 2000step@mail.ru

Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины, ул. Черниговская, 5, Санкт-Петербург, 196084, Россия

УДК 579.64:636.5
DOI: 10.32634/0869-8155-2024-385-8-51-55

Просмотров: 175


Источник: https://agrarnayanauka.ru/ispolzovanie-montanide-isa-78-vg-v-kachestve-adyuvanta-pri-izgotovlenii-protivobakterialnyh-vakczin-dlya-kur/

Межтекстовые Отзывы
Посмотреть все комментарии
guest