• Виктория

Оценка биоэквивалентности ветеринарных препаратов «Холликалм» и «Серения» в форме таблеток в организме собак

Рвота является распространенным симптомом для клинической оценки состояния здоровья мелких домашних животных. К наиболее частым причинам возникновения патологической рвоты у собак можно отнести гастриты и язвы желудка, отравления различного генеза, нарушение проходимости желудочно-кишечного тракта, бактериальные и вирусные инфекции, а также инвазии. В то же время у мелких домашних животных часто рвоту вызывает укачивание, связанное с транспортировкой кошек и собак.

Механизм рвоты регулируется рвотным центром, расположенным в продолговатом мозге. Стимуляция этого центра происходит благодаря электрическим импульсам, поступающим по периферическим нервным волокнам. Это приводит к возникновению серии нервных импульсов, которые вызывают сокращение диафрагмы и мышц живота, а также расслабление кардии желудка, в результате чего происходят антиперистальтика пищевода и удаление содержимого желудка через пасть животного.

Предшествуют рвоте, как правило, тошноты (апатия, повышенное слюноотделение, облизывание, учащенные глотательные движения) и потеря аппетита. Тяжелая рвота может привести к обезвоживанию организма, развитию гиповолемического шока, нарушению кислотно-основного и электролитного баланса организма. Частая и сильная рвота может вызвать аспирационную пневмонию.

Лечение непрекращающейся рвоты улучшает самочувствие животного и позволяет предотвратить осложнения. В то же время животное нуждается в тщательном обследовании для определения и устранения причины, лежащей в основе патологического рвотного процесса.

Для купирования приступов рвоты у собак применяют ветеринарные препараты, содержащие в качестве действующего вещества маропитанта цитрат.

Учитывая важность расширения ассортимента препаратов, предупреждающих рвоту, и в рамках импортозамещения компанией ООО «ВИК — здоровье животных» был разработан препарат «Холликалм» в форме таблеток.

Маропитант — действующее вещество «Холликалма» — является антагонистом нейрокининовых рецепторов (NK1) и ингибирует связывание субстанции Р, нейропептида тахикининовой группы в центральной нервной системе, что позволяет предотвратить рвоту.

Оценка биоэквивалентности («фармакокинетической эквивалентности») лекарственных средств является основным видом исследований воспроизведенных (генерических) препаратов, содержащих такое же количество действующего вещества, как в соответствующем оригинальном лекарственном препарате, позволяющая сделать обоснованные заключения о эффективности и безопасности сравниваемых лекарственных средств по относительно меньшему объему доклинических исследований и в более короткие сроки, чем при проведении клинических исследований.

При изучении биоэквивлентности возможно оценить скорость и степень всасывания действующих веществ двух сравниваемых препаратов, на основании которых сделать вывод о биоэквивалентности воспроизведенного препарата в определенной лекарственной форме и дозировке, соответствующих лекарственной форме и дозировке референтного препарата.

Цель работы — изучение биоэквивалентности воспроизведенного препарата «Холликалм» в форме таблеток (организация-производитель ООО «ВИК — здоровье животных», Россия) и референтного препарата «Серения» в форме таблеток (организация-производитель Zoetis Inc., США) на собаках после их однократного перорального введения.

«Серения» был выбран в качестве референтного препарата на основании данных электронной системы «Гален» Россельхознадзора, где «Серения» имеет действующую регистрацию в Российской Федерации и был зарегистрирован на основании результатов доклинических и клинических исследований, подтверждающих его качество, эффективность и безопасность.

Материалы и методы исследования

В качестве тест-системы для исследования были выбраны собаки как вид животных, которым в дальнейшем планируется применение препарата и которым удобно, не нарушая целостности таблеток, перорально вводить препараты.

Научно-исследовательская работа была проведена в 2023 году. В эксперименте использовали кавказскую овчарку в возрасте 2–3 лет с массой тела 41–48 кг.

Была сформирована опытная группа из 6 собак (сук и кобелей). Каждая группа животных состояла из 6 особей, каждой из которых был присвоен индивидуальный номер. Экспериментальные животные в течение не менее чем 30 суток до начала исследований и в период исследований не получали никаких других лекарственных препаратов.

В исследовании был использован последовательный дизайн эксперимента, что обусловлено относительно коротким периодом полувыведения (до 9 часов) действующего вещества маропитант из организма животных. Выбранный дизайн предусматривает последовательное введение одной группе животных сначала референтного лекарственного препарата, а затем воспроизведенного лекарственного препарата с временным интервалом между введениями не менее шестикратного периода полувыведения действующего вещества. В рамках описываемой работы период между введениями препаратов «Серения» и «Холликалм» составил 72 часа.

Перед проведением опыта каждое животное взвешивали для расчета индивидуальной дозы препарата. Испытуемые препараты задавали собакам однократно, индивидуально, пероральным путем.

Для исследований использовали препараты «Серения» и «Холликалм», содержащие в 1 таблетке 60 мг маропитанта. Доза препаратов, которая была введена каждому животному, — около 8 мг маропитанта на 1 кг массы животного. Данная доза является максимальной терапевтической в соответствии с утвержденной инструкцией по применению референтного препарата.

Индивидуальные значения массы тела экспериментальных собак и полученные ими дозы действующего вещества препаратов указаны в таблице 1.

Временные точки отбора биообразцов для оценки концентрации маропитанта в сыворотке крови были выбраны таким образом, чтобы получить наиболее полные данные для каждого фрагмента фармакокинетической кривой. С этой целью был предусмотрен частый отбор образцов вблизи Tmax, а также не менее 4 точек в течение терминальной фазы. Таким образом, отбор биообразцов производился в следующих точках: перед приемом воспроизведенного (референтного) препарата и далее — через 15, 30, 45 мин. и 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 15, 24, 32 и 48 ч. после приема препаратов.

На каждый срок отбор проб крови был произведен у 6 собак в группе. При проведении манипуляций были соблюдены принципы гуманного обращения с экспериментальными животными, направленные на снижение у них уровня боли и дистресса. Кровь отбирали в промаркированные шифром пробы одноразовые пробирки с активатором свертывания. После образования сгустка и отделения сыворотки пробы крови центрифугировали при 3500 об/мин в течение 5 минут. После этого отделенную фракцию сыворотки крови помещали в пробирки типа Eppendorf. Образцы сыворотки крови замораживали и транспортировали в термоконтейнере в замороженном состоянии в биоаналитическую лабораторию «БИОВИЗОР» (г. Москва, Россия).

Основным параметром, который определяли в процессе исследования, являлось содержание действующего вещества препаратов в сыворотке крови собак. Для этого применяли валидированную методику количественного определения маропитанта в образцах сыворотки крови животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. С этой целью использовали хромато-масс-спектрометрическую систему Shimadzu LCMS-8050 (Япония).

При валидации методики учитывали следующие показатели: линейность, матричный эффект, степень извлечения, специфичность, селективность, эффект переноса, прецизионность, правильность, наименьший предел количественного определения, допустимость разбавления, стабильность аналита и внутреннего стандарта.

Полученные концентрации маропитанта в сыворотке крови собак использовали для расчета следующих фармакокинетических параметров:

  •  период полувыведения действующего вещества (T1/2);
  •  максимальная концентрация действующего вещества  (Cmax);
  •  площадь под кривой «концентрация действующего вещества — время» в интервале времени от 0 до момента (t) отбора последней пробы биоматериала (AUC0-t);
  •  площадь под кривой «концентрация действующего вещества — время» в интервале от 0 до ∞ (AUC0-∞);
  •  площадь под кривой «произведение времени на концентрацию препарата (AUMC);
  •  среднее время удержания вещества в системном кровотоке (MRT);
  •  соотношение AUC0-t/AUC0-∞.

На основе рассчитанных параметров Cmax и AUC0-t производили оценку биоэквивалентности испытанных препаратов.

Статистический анализ полученных в ходе эксперимента данных включал в себя нахождение средних величин относительных стандартных отклонений (RSD, %) от средних и стандартных ошибок в программе Microsoft Excel (США). Расчеты фармакокинетических параметров были выполнены в программе PKSolver (надстройка для Microsoft Excel) с применением некомпартментной (бескамерной) модели распределения маропитанта в организме собак.

Установление биоэквивалентности сравниваемых препаратов производилось путем сопоставления границ доверительных интервалов для отношения геометрических средних показателей AUC (0–24) и Cmax после приема исследуемого и референтного препаратов с установленными границами эквивалентности, равными 80,00–125,00%.

Эксперимент проводился с соблюдением требований, изложенных в Директиве Европейского парламента и Совета Европейского союза 2010/63/ЕС от 22 сентября 2010 года о защите животных, использующихся для научных целей, и принципов обращения с животными согласно статье 4 ФЗ РФ N 498-ФЗ.

Результаты и обсуждение

На основании полученных данных (табл. 2) установлено, что маропитант быстро всасывается и обнаруживается в сыворотке крови собак спустя 15 минут — как после введения референтного препарата «Серения», так и после введения воспроизведенного препарата «Холликалм».

Для референтного препарата пик концентрации маропитанта в крови был достигнут через 1–4 часа после введения, при этом максимальная концентрация действующего вещества находилась в диапазоне 542,503–928, 920 нг/мл.

Затем концентрация действующего вещества в сыворотке крови плавно уменьшалась до уровня 4,041–12,734 нг/мл к последнему сроку отбора крови (48 ч.). Схожая картина наблюдалась после введения воспроизведенного препарата. Концентрация маропитанта достигала максимума к 1,5–2 часам после введения и находилась в диапазоне 541,379–855,536 нг/мл. Далее происходило плавное снижение концентрации действующего вещества до уровня 1,867–14,062 нг/мл к последнему сроку отбора крови (48 ч.).

График изменения концентрации маропитанта в крови собак представлен на рисунке 1.

На основании измеренных концентраций маропитанта в сыворотке крови собак провели расчет его фармакокинетических параметров (табл. 3).

Данные (табл. 3) продемонстрировали, что средние значения рассчитанных параметров фармакокинетики действующего вещества для исследуемого воспроизведенного и референтного препаратов были схожи. Например: среднее арифметическое значение Cmax для референтного препарата составило 675,280 нг/мл, а для воспроизведенного — 679,615 нг/мл; период полураспада маропитанта для препарата «Серения» в среднем 8,0 ч., для препарата «Холликалм» — 8,1 ч.; арифметическая средняя площадь под фармакокинетической кривой (от нуля до последнего определения в крови) маропитанта для референтного препарата 6150,460 нг/мл•ч, а для воспроизведенного — 5654,302 нг/мл•ч.

По остальным вычисленным фармакокинетическим параметрам (AUC0-∞, AUMC0-∞, MRT, AUC0-t/AUC0-∞) значения также были близкими. Наличие (отсутствие) биоэквивалентности между воспроизведенным препаратом «Холликалм» и референтным «Серения», отобранным для исследований по лекарственной форме и содержанию действующих веществ, оценивали в соответствии с Правилами проведения исследований биоэквивалентности лекарственных средств Евразийского экономического союза. Биоэквивалентность препаратов оценивали на основе предположения о логнормальном распределении измеренных величин Cmax, AUC(0-t), AUC(0-∞) и Cmax/AUC(0-t).

Результаты вычисления доверительных интервалов для отношений фармакокинетических параметров маропитанта представлены в таблице 4.

Двусторонние доверительные интервалы для отношений Cmax, AUC0-t находятся в пределах 80–125%.

Таким образом, на основании полученных данных, учитывая, что доверительные интервалы отношений для логарифмически-преобразованных значений Cmax и AUC0-t и не выходят за установленные рамки, гипотеза о биоэквивалентности препаратов «Серения» и «Холликалм» принимается.

Выводы

Проведено регистрационное клиническое исследование биоэквивалентности воспроизведенного препарата «Холикалм» в сравнении с референтным препаратом «Серения» в опыте на целевом виде животных — собаках.

Показана высокая степень сходства индивидуальных и усредненных фармакокинетических профилей исследуемых препаратов по действующему вешеству маропитант. Воспроизведенный и референтный препараты характеризуются близкими значениями показателей относительной биодоступности и максимальной концентрации маропитанта. Доверительный интервал для отношений средних геометрических значений фармакокинетических параметров маропитанта полностью соответствуют заданному диапазону.

Таким образом, полученные в ходе данного исследования результаты позволили сделать заключение о биоэквивалентности воспроизведенного препарата «Холикалм», разработанный компанией «ВИК — здоровье животных» (Россия), относительно референтного препарата «Серения» (Зоэтс, США), что позволяет рекомендовать «Холикалм» к использованию в ветеринарной практике в качестве противорвотного средства для собак.

Об авторах

Сергей Владиславович Абрамов1; кандидат ветеринарных наук

120.net@mail.ru; https://orcid.org/0000-0002-9445-4577

Андрей Владимирович Балышев2; кандидат биологических наук

bav898@yandex.ru; https://orcid.org/0000-0002-9186-2671

Вячеслав Викторович Головин1; кандидат биологических наук

v.golovin@biovizor.ru; https://orcid.org/0009-0001-5123-9068

Павел Павлович Кочетков1

kochetkov@biovizor.ru; https://orcid.org/0000-0001-6688-5540

Борис Викторович Виолин3; кандидат ветеринарных наук

b_viol@yahoo.com

1ООО «БИОВИЗОР», ул. Нагорная, 3А, Москва, 117186, Россия

2Поволжский научно-исследовательский институт производства и переработки мясомолочной продукции, ул. им. Рокоссовского, 6, Волгоград, 400131, Россия

3Федеральный научный центр — Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук, Рязанский пр-т, 24, стр. 1, Москва, 109428, Россия

УДК 619:615.033
DOI: 10.32634/0869-8155-2024-385-8-34-39

Просмотров: 253


Источник: https://agrarnayanauka.ru/oczenka-bioekvivalentnosti-veterinarnyh-preparatov-hollikalm-i-sereniya-v-forme-tabletok-v-organizme-sobak/

Межтекстовые Отзывы
Посмотреть все комментарии
guest